三、方 法

    1.细胞培养与分组

    复苏NCM460，培养于RPMI 1640培养基中(含10%胎牛血清)，传代24 h后，于细胞培养基中分别加入药物干预，并分为5组：5 mmol/L葡萄糖(阴性对照组，NG组)，33 mmol/L葡萄糖(高糖组，HG组)，33 mmol/L甘露醇(渗透压对照组，MNG组)，5 mmol/L葡萄糖及4 mmol/L丁酸(NG-Bu组)，33 mmol/L葡萄糖及4 mmol/L丁酸(HG-Bu组)。每日换液，培养48 h后收集细胞，制成单细胞悬液用于进一步实验。

    2.总RNA的提取及实时荧光定量PCR (QPCR)反应

    收集上述各组细胞，用Trizol法提取各组细胞总RNA，测定RNA 浓度及纯度后合成cDNA。以cDNA为模板进行QPCR反应。反应结束后得到各个样本和内参β-actin的Ct值，以目的基因表达的相对定量值(RQ值)，即为RNA的相对含量进行统计学分析 ......