深红虫草次级代谢产物的分离与鉴定(1)
中图分类号 R284.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408(2018)03-0353-04
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.03.15
摘 要 目的：对深红虫草的次级谢产物进行分离、鉴定，为进一步发掘深红虫草活性物质和丰富虫草类真菌天然产物库提供参考。方法：采用正相硅胶柱层析、C18反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、薄层色谱等色谱技术对深红虫草发酵液中的化合物进行分离；通过核磁共振氢谱、核磁共振碳谱和质谱分析对分离的化合物进行结构鉴定。结果：从深红虫草发酵液的乙酸乙酯萃取部分共分离得到6个化合物，分别鉴定为5-甲基-1，3-苯二酚(化合物1)、4-hydroxy-17R-methylincisterol(化合物2)、5α，8α- 氧桥-(22E，24R)-麦角甾-6，22-二烯-3β-醇(化合物3)、3β，5α，6β-三羟基-(22E，24R)-麦角甾-7，22-二烯(化合物4)、尿嘧啶核苷(化合物5)、卵孢菌素(化合物6)。结论：本研究从该属真菌中分离得到了6个化合物，其中化合物1和化合物2为首次分离得到。
关键词 深红虫草；次级代谢产物；分离；鉴定
ABSTRACT OBJECTIVE： To isolate and identify the secondary metabolites of Cordyceps cardinalis for providing reference for the further exploration of the active substance of C. cardinalis and the natural product library of Cordyceps. METHODS： The compounds from C. cardinalis fermentation broth were isolated by silica gel column chromatography， C18 reverse phase silica gel chromatography， Sephadex LH-20 gel column chromatography， TLC and so on. The structures of isolated compound were identified by 1H-NMR， 13C-NMR and MS spectra. RESULTS： Six compounds were isolated from the ethyl acetate extract of C. cardinalis fermentation broth as 5-methyl-1，3-benzenediol (compound 1)， 4-hydroxy-17R-methylincisterol (compound 2)， 5α， 8α-epidioxy-(22E，24R)-ergosta-6，22-dien-3β-ol (compound 3)， 3β，5α，6β-trihydroxy-(22E，24R)-ergosta-7，22-dien (compound 4)， uridine (compound 5)， oosporein (compound 6). CONCLUSIONS： Six compounds are isolated from C. cardinalis strain， among which compound 1 and compound 2 are isolated from the genus Cordyceps for the first time.
KEYWORDS Cordyceps cardinalis； Secondary metabolite； Isolation； Identification
虫草是寄生于昆虫、少数真菌和植物体上的一类真菌，是一种具有营养、保健和医疗功效的宝贵生物资源。目前，我国的虫草产业涉及了冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、蛹虫草(Cordyceps militaris)、蝉花(Isaria cicadae)及相关真菌，已经形成了一个巨大的产业，实现了较高的经济价值和社会效益[1]。虫草的次级代谢产物普遍具有较好的抗菌、抗肿瘤活性，被认为是最有可能从中发现新型生物活性物质或药物先导化合物的类群[2]。迄今为止，全世界报道的虫草种类有350余种，但现有研究仅针对冬虫夏草、蛹虫草等10余种常见虫草的次级代谢产物进行了研究[3]，从中检测或分离到的活性物质主要为核苷类(虫草素、腺苷等)、虫草酸(D-甘露醇)、虫草多糖、麦角甾醇、多糖类等[2，4]。深红虫草是一种寄生于鳞翅目幼虫的病原真菌，作为新纪录种于2010年首次被我国报道。Umeyama A等[5]于2014年从深红虫草(C. cardinalis NBRC 103832)中分离得到了3种具有体外抗锥虫活性的环孢素类化合物。为进一步发掘深红虫草活性物质，丰富虫草类真菌的天然产物库，本研究拟对深红虫草进行大量液体培养，并对发酵产物进行分离、纯化和结构鉴定。
1 材料
1.1 仪器
CXZ智能型光照培养箱(宁波江南仪器厂)；AVANCE Ⅲ型500 MHz核磁共振(NMR)波譜仪(德国Bruker公司)；API 2000型液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)仪(美国Sciex公司)；ZF-6型三用紫外线分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)；Hangping FA2004型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；RE-2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；PZ1000B型转式大容量普通摇床(武汉瑞华仪器设备有限公司)。, http://www.100md.com(卢梦梦 李义勇 刘洪新 郝再彬 章卫民)
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.03.15
摘 要 目的：对深红虫草的次级谢产物进行分离、鉴定，为进一步发掘深红虫草活性物质和丰富虫草类真菌天然产物库提供参考。方法：采用正相硅胶柱层析、C18反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、薄层色谱等色谱技术对深红虫草发酵液中的化合物进行分离；通过核磁共振氢谱、核磁共振碳谱和质谱分析对分离的化合物进行结构鉴定。结果：从深红虫草发酵液的乙酸乙酯萃取部分共分离得到6个化合物，分别鉴定为5-甲基-1，3-苯二酚(化合物1)、4-hydroxy-17R-methylincisterol(化合物2)、5α，8α- 氧桥-(22E，24R)-麦角甾-6，22-二烯-3β-醇(化合物3)、3β，5α，6β-三羟基-(22E，24R)-麦角甾-7，22-二烯(化合物4)、尿嘧啶核苷(化合物5)、卵孢菌素(化合物6)。结论：本研究从该属真菌中分离得到了6个化合物，其中化合物1和化合物2为首次分离得到。
关键词 深红虫草；次级代谢产物；分离；鉴定
ABSTRACT OBJECTIVE： To isolate and identify the secondary metabolites of Cordyceps cardinalis for providing reference for the further exploration of the active substance of C. cardinalis and the natural product library of Cordyceps. METHODS： The compounds from C. cardinalis fermentation broth were isolated by silica gel column chromatography， C18 reverse phase silica gel chromatography， Sephadex LH-20 gel column chromatography， TLC and so on. The structures of isolated compound were identified by 1H-NMR， 13C-NMR and MS spectra. RESULTS： Six compounds were isolated from the ethyl acetate extract of C. cardinalis fermentation broth as 5-methyl-1，3-benzenediol (compound 1)， 4-hydroxy-17R-methylincisterol (compound 2)， 5α， 8α-epidioxy-(22E，24R)-ergosta-6，22-dien-3β-ol (compound 3)， 3β，5α，6β-trihydroxy-(22E，24R)-ergosta-7，22-dien (compound 4)， uridine (compound 5)， oosporein (compound 6). CONCLUSIONS： Six compounds are isolated from C. cardinalis strain， among which compound 1 and compound 2 are isolated from the genus Cordyceps for the first time.
KEYWORDS Cordyceps cardinalis； Secondary metabolite； Isolation； Identification
虫草是寄生于昆虫、少数真菌和植物体上的一类真菌，是一种具有营养、保健和医疗功效的宝贵生物资源。目前，我国的虫草产业涉及了冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)、蛹虫草(Cordyceps militaris)、蝉花(Isaria cicadae)及相关真菌，已经形成了一个巨大的产业，实现了较高的经济价值和社会效益[1]。虫草的次级代谢产物普遍具有较好的抗菌、抗肿瘤活性，被认为是最有可能从中发现新型生物活性物质或药物先导化合物的类群[2]。迄今为止，全世界报道的虫草种类有350余种，但现有研究仅针对冬虫夏草、蛹虫草等10余种常见虫草的次级代谢产物进行了研究[3]，从中检测或分离到的活性物质主要为核苷类(虫草素、腺苷等)、虫草酸(D-甘露醇)、虫草多糖、麦角甾醇、多糖类等[2，4]。深红虫草是一种寄生于鳞翅目幼虫的病原真菌，作为新纪录种于2010年首次被我国报道。Umeyama A等[5]于2014年从深红虫草(C. cardinalis NBRC 103832)中分离得到了3种具有体外抗锥虫活性的环孢素类化合物。为进一步发掘深红虫草活性物质，丰富虫草类真菌的天然产物库，本研究拟对深红虫草进行大量液体培养，并对发酵产物进行分离、纯化和结构鉴定。
1 材料
1.1 仪器
CXZ智能型光照培养箱(宁波江南仪器厂)；AVANCE Ⅲ型500 MHz核磁共振(NMR)波譜仪(德国Bruker公司)；API 2000型液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)仪(美国Sciex公司)；ZF-6型三用紫外线分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)；Hangping FA2004型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；RE-2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；PZ1000B型转式大容量普通摇床(武汉瑞华仪器设备有限公司)。, http://www.100md.com(卢梦梦 李义勇 刘洪新 郝再彬 章卫民)