铁皮石斛Ty1copia类反转录转座子反转录酶(RT)序列的克隆与分析(2)
2.3PCR 产物回收、克隆及测序用1%琼脂糖凝胶检测扩增产物，并用凝胶回收试剂盒回收并纯化PCR产物，直接将回收产物连接于pMD18-T 载体(TaKaRa公司)上，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，37 ℃培养12～16 h进行蓝白斑筛选，挑取白色克隆于含有50 mg·L-1氨苄青霉素的LB液体培养基中培养4～6 h后，PCR鉴定阳性克隆的菌液，于上海生工生物工程(上海)股份有限公司测序。
2.4反转录酶序列分析
测序结果通过NCBI中BLAST程序进行同源性比对，采用Clustal X软件进行多重比对，用MEGA 5.0软件邻接法构建系统发育进化树。
3结果与分析
3.1反转录酶(RT)序列PCR 扩增及测序
供试材料C15和A39中都检测到了反转录酶序列，长度均为 260 bp左右(图1)，这与在其他植物上的研究报道一致[15-16]，说明供试材料C15和A39都有一致的目的扩增产物 ......
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