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编号:13131180
茵陈蒿汤对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的逆转作用(2)
http://www.100md.com 2014年4月15日 《中国中药杂志》 2014年第8期
     2.3 样品采集 给药第5周末腹腔注射5%异戊巴比妥麻醉大鼠,于腹腔静脉取血,收集血液,离心分离出血清,留取部分血清用于血清指标测定,其余血清于-80 ℃冰箱保存备用;取肝组织左叶下段组织(10 mm×10 mm×10 mm),用4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜下作病理学检查,肝纤维化分级采用Scheuer法。分装余下肝组织,迅速放入液氮中,置于-80 ℃冰箱保存备用。

    2.4 肝组织前处理及HPLC分析条件 参照文献报道的方法[8],经适当地改进后建立了如下的肝组织消化处理方法,取冷冻的肝脏样本0.150 0~0.200 0 g,置于水解玻璃瓶中,加入6 mol·L-1的HCl 10 mL,然后用酒精喷灯烧结瓶口,再放入烘箱中,于110 ℃温度下持续24 h进行消化处理,待样本冷却后,用镊子敲碎水解玻璃瓶,将沉淀摇匀并取其中的100 μL放入2 mL塑料锥形管中,然后于15 000 r·min-1离心5 min,取上清液10 μL放入锥形塑料瓶中,氮气吹干,然后用10 μL蒸馏水溶解。

    柱前衍生:溶解以后的样品用10 μL的9-芴基甲氧基碳酰氯(FMOC)和20 μL硼酸进行衍生并在35 ℃的温度下恒温衍生10 min[9] ......
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