四物汤对Caco—2细胞P—糖蛋白功能和表达的影响(3)
2.5 流式细胞仪检测Caco-2细胞P-gp外排功能 给药分组与2.4项相同。分别于37 ℃，5%CO2培养箱中用含药培养基中培养1，48 h，PBS洗2次，弃上清，用胰酶消化，收集细胞转入1.5 mL EP管中，4 ℃下2 500 r·min-1离心5 min，弃上清，PBS洗2次，离心弃上清。每管加入罗丹明123(终浓度为10 μmol·L-1)，重悬后在37 ℃，5%CO2培养箱中培养60 min，置冰上终止作用，4 ℃下2 500 r·min-1离心5 min，弃上清，用预冷的PBS洗2次，离心弃上清。加PBS 300 μL轻轻吹打，制成单个细胞悬液。在激发波长为466 nm、发射波长为535 nm条件下选择FITC通道测定2万个细胞，收集535 nm处的罗丹明123荧光进行分析，分析时除去细胞碎片和细胞团块对测定的干扰，实验重复3次。按下列公式计算罗丹明123的相对荧光强度=A实验组/A空白对照组×100% ......
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