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编号:12855251
太子参分解代谢关键酶8′羟化酶基因的克隆及生物信息学分析(3)
http://www.100md.com 2016年7月1日 《中国中药杂志》2016年第13期
     2.5 脱落酸ABA-8′羟化酶基因的表达分析 利用软件设计Primer Premier 5设计定量PCR引物,扩增片段长度为110 bp,ABA8ox1-F:5′-ATGGTGATCATATTTGTAGCTTTG-3′;ABA8ox1-R:5′-CTATTGACTTTTGCTAAATAATTTA-3′,下划线标注为起始密码子与终止密码子。反应体系参照SYBR Premix Ex TaqTMⅡ说明书,以太子参PhACT2作为内参基因,生物学重复3次。反应结束后确认Real Time PCR的扩增曲线和融解曲线,分析方法参考ABI 7500 Real-Time PCR System的操作手册,用2-△CT分析ABA8ox1在不同组织中的表达量,并对基于转录组数据的表达分析进行验证。

    3 结果与分析

    3.1 太子参8′羟化酶基因的鉴定 以拟南芥及水稻等模式植物的ABA8′羟化酶基因作为query序列,应用本地Blast软件检索太子参转录组数据库,获得7个基因家族成员(表1) ......
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