PPARs激动剂体外筛选模型的建立及其在泽泻活性成分筛选中的应用(3)
2.2 pGL4.35报告质粒
pGL4.35质粒结构见图2，质粒购买自美国普洛麦格(Promega)公司。
2.3 PPARs表达质粒细胞转染及其表达验证
2.3.1 细胞培养 293T细胞在37 ℃，5% CO2，饱和湿度的培养箱中用含10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、100 mg·L-1链霉素的DMEM培养基培养，每3～4 d以0.25%胰蛋白酶进行消化传代。
2.3.2 PPARs质粒转染细胞及其载体表达检测 ①接种细胞，转染前5～8 h将293T细胞以每孔细胞密度1×104个/mL接种至6孔板中，每孔2 mL，培养至细胞融合率达70%～90%取出；②将4 μg的pBind-PPARs-LBD质粒和2 μg的pGL4.35报告质粒加至150 μL的无血清DMEM培养基中，并向其中加入6 μL的PLUSTM Reagent混匀。PLUSTM Reagent与DNA的比例为1∶1(L∶g)；③将15 μL的Lipofectamine LTXReagent加至另外150 μL的无血清DMEM培养基中 ......
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pGL4.35质粒结构见图2，质粒购买自美国普洛麦格(Promega)公司。
2.3 PPARs表达质粒细胞转染及其表达验证
2.3.1 细胞培养 293T细胞在37 ℃，5% CO2，饱和湿度的培养箱中用含10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、100 mg·L-1链霉素的DMEM培养基培养，每3～4 d以0.25%胰蛋白酶进行消化传代。
2.3.2 PPARs质粒转染细胞及其载体表达检测 ①接种细胞，转染前5～8 h将293T细胞以每孔细胞密度1×104个/mL接种至6孔板中，每孔2 mL，培养至细胞融合率达70%～90%取出；②将4 μg的pBind-PPARs-LBD质粒和2 μg的pGL4.35报告质粒加至150 μL的无血清DMEM培养基中，并向其中加入6 μL的PLUSTM Reagent混匀。PLUSTM Reagent与DNA的比例为1∶1(L∶g)；③将15 μL的Lipofectamine LTXReagent加至另外150 μL的无血清DMEM培养基中 ......
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