23药物与流动预处理及TNFα损伤模型的建立

    采用BioFlux 1000控剪应力微流培养系统在流动条件下培养内皮细胞[15]。铺被Ⅰ型鼠尾胶原(006 g·L-1)于48孔微流培养板，20 μL内皮细胞悬液(2×1010～3×1010 个/L)加至微流通道[16]，利用液体压力差维持培养基流动内皮细胞的生长，37 ℃孵箱过夜。微流观察通道的细胞达到90%融合后，分别施加01，09 Pa剪应力，使不同水平剪应力与药物预处理细胞12 h。加入含TNFα(20 μg·L-1)的培养基与内皮细胞共培养2 h，正常对照组加入等体积的ECM培养基。收集细胞上清液，-20 ℃冻存，备测。

    24血小板黏附

    将300 μL(约25×1011 个/L)人血小板悬液加入微流观察通道，37 ℃，001 Pa记录血小板的黏附过程，记录时间为45 min；采图，每组至少3张，计数黏附的血小板。吸弃剩余血小板悬液，PBS溶液冲洗通道后，用含1 mmol·L-1 PMSF的RIPA细胞裂解液裂解通道内细胞，收集流出液，4 ℃ 12 000 r·min-1离心5 min，吸取上清液，-20 ℃冻存，用于Western blotting蛋白电泳分析 ......