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编号:13331296
miR—199b促进慢性创面血管化的作用及机制研究(3)
http://www.100md.com 2019年1月1日 《中国美容医学》 2019年第1期
     1.4.3 PI-FACS细胞周期检测mir-199b对HaCaT细胞周期的影响: 分组方式同1.4.2。将3组细胞感染后第3天传代,第4天换无血清培养,第5天换正常培养基,5h后检测miR-199b up、miR-199b down组与对照组处在G1,S以及G2/M期的细胞占细胞总数的比例。

    1.4.4 凋亡试验检测mir-199b对HaCaT细胞迁移能力的影响:分组方式同1.4.2。待各实验组6孔板细胞生长至覆盖率约为70%时药物诱导凋亡。若为贴壁细胞,则上清中细胞也需收集。胰酶消化,完全培养基重悬成细胞悬液,与上清细胞收集于同一个5ml离心管中,每组设3个复孔。若为悬浮细胞,直接收集。1 300rmp离心5min,弃上清,4℃预冷的D-Hanks(pH=7.2~7.4)洗涤细胞沉淀。1×binding buffer洗涤细胞沉淀1次,1 300rmp、离心3min,收集细胞。200?l 1×binding buffer重悬细胞沉淀,加入10?l Annexin V-APC染色,室温避光10~15min ......
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