1 材料和方法

    1.1 材料：DMEM培养液(Gibco，美国)、胎牛血清(Gibco，美国)、PBS(Invitrogen，美国)、2mM谷氨酰胺、100U/ml青霉素(Amersham，美國)、原代培养器具盒(眼科剪、眼科镊、手术刀)、PrimeScript? RT Master Mix (Perfect Real Time)(Takara，中国)、SYBR Green Real-Time PCR Master Mixes(Thermo Fisher，美国)。

    1.2 仪器：光学显微镜(Leica SE，日本)、实时定量PCR仪(ABI7500，美国)、多孔板酶标仪(Bio-Tech，美国)。

    1.3 方法

    1.3.1 大鼠原代牙周膜细胞获取及培养：配置含20%胎牛血清、100mg/L青-链双抗的高糖DMEM培养基，常规组织块法获取大鼠原代牙周膜细胞。1周后观察，有细胞爬出，每3d换液1次。待原代细胞生长至80%融合时，0.25%胰蛋白酶37℃消化，以1：3比例传代培养。

    1.3.2 细胞分组和处理：取生长状态良好的第二代大鼠牙周膜细胞 ......