SHH蛋白在大肠腺瘤和大肠癌中的表达及意义(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.2试剂及方法免疫组化染色采用Envison二步法，一抗shh多克隆抗体采购于美国Santa Cruz公司，试剂盒选用上海长岛公司。抗原修复方法采用高压锅柠檬酸盐缓冲液(pH＝6.0)煮沸法，一抗浓度1∶150，反应条件为4℃过夜，二抗反应条件为37℃半小时。
1.3结果评价以无背景染色，肿瘤细胞质内棕黄色颗粒为阳性信号,无染色或与背景同色判断为阴性。染色评分包括A和B两方面[5-6]，(1)A：每例代表性切片随机评价5个高倍视野，阳性瘤细胞数占全部瘤细胞的10%以上者定义为阳性病例。根据阳性细胞的比例评分：0～10%：0分；10%～25%：1分；25%～50%：2分；50%以上：3分。(2)B:根据细胞染色的深浅评分：阴性：0分；浅黄色：1分；棕黄色：2分；棕褐色：3分。染色评分结果=A×B。
1.4统计学处理应用统计软件SPSS 13.0进行统计分析，计数资料比较采用卡方检验；计量资料以±s表示，比较采用t检验或者方差分析，P<0.05表示有统计学意义。
2结果
2.1Shh蛋白在正常大肠黏膜组织的表达正常大肠黏膜表面上皮及部分腺体细胞质内显示Shh阳性表达(插页Ⅷ图1A)，其阳性表达率为20.0%(5/25)。
表148例大肠腺瘤Shh表达与临床病理因素关系
临床病理因素 例数Shh表达阳性数(%)P值染色评分±sP值性别0.9300.816男2516(64.0)2.00±2.12女2315(65.2)2.39±2.14年龄(岁)0.7320.503<602718(66.7)2.22±2.21≥602113(61.9)2.14±2.06肿瘤部位0.6790.256结肠3020(66.7)2.10±2.02直肠1811(61.1)2.42±2.29肿瘤最大径(cm)0.5460.456≤1158(53.3)1.47±1.811~22014(70.0)2.15±2.03>2139(69.2)3.08±2.40组织学类型0.5290.373管状腺瘤169(56.3)1.87±1.51管状-绒毛状腺瘤1610(62.5)1.98±1.88绒毛状腺瘤1612(75.0)2.38±1.82腺瘤分级管状腺瘤0.9490.011低级别95(55.5)1.0±1.20高级别74(57.1)2.75±2.38管状-绒毛状腺瘤0.3020.009低级别84(50.0)1.00±1.20高级别86(75.0)3.00±2.62绒毛状腺瘤0.5690.022低级别85(62.5)1.13±1.16高级别87(87.5)3.38±1.692.2Shh蛋白在大肠腺瘤中的表达Shh蛋白在大肠腺瘤的阳性表达率为64.6%(31/48),明显高于正常大肠组织(P<0.01)。其在腺瘤各组织学分型及分级的标本中均有部分病例表达，阳性信号分布在肿瘤细胞内(见插页Ⅷ图1B～D)；Shh的染色评分与腺瘤组织学分级有关，在高级别各组织学类型腺瘤中的表达均显著高于低级别腺瘤(P<0.05)，而与其它参数无关(P>0.05)，见表1。
表250例大肠癌Shh表达与临床病理因素关系
临床病理因素 例数Shh表达阳性数(%)P值染色评分±sP值性别0.8630.817男3420(58.8)2.21±2.03女169(56.3)2.06±2.05年龄(岁)0.5470.472<601910(52.6)1.89±1.88≥603119(58.1)2.32±2.10肿瘤部位0.6910.691右半结肠1510(61.3)2.53±2.00左半结肠148(57.1)2.07±2.09直肠2111(52.4)1.95±2.04肿瘤最大径(cm)0.7740.723≤396(66.7)2.11±1.763~52213(59.1)2.41±2.18>51910(52.6)1.89±2.00大体类型0.8710.567肿块型137(53.8)1.77±1.79溃疡型3118(58.1)2.19±2.06浸润型64(66.7)2.83±2.40组织类型0.4850.990乳头状+管状腺癌3821(55.3)2.16±2.13黏液腺癌+印戒细胞癌128(66.7)2.17±1.70分化程度0.7830.884高分化128(66.7)2.42±1.88中分化2715(55.5)2.07±2.07低分化116(54.5)2.09±2.17肿瘤分期0.0070.000早期大肠癌2116(76.2)3.22±1.93进展期大肠癌2913(44.8)1.26±1.632.3Shh蛋白在大肠癌组织中的表达在大肠癌组织中Shh阳性表达率为58.0%(29/50)，明显高于正常大肠组织(P<0.05)，其阳性信号均分布在癌细胞质内。Shh的表达与肿瘤分期有关，从阳性率和染色评分两方面评价，早期大肠癌的表达均显著高于进展期大肠癌(P<0.01，P<0.0001)(见插页Ⅷ图1E～F)，而与性别、年龄及肿瘤部位、大小、类型、肿瘤分化程度等病理参数无关(P>0.05)，见表2。
3讨论
Hedgehog(Hh)基因最初是从突变的果蝇体内发现。1993年Forbes等[7]通过果蝇基因分析，首先提出Hedgehog信号通路(Hedgehog signa—ling，Hh信号通路)的概念。脊椎动物和非脊椎动物多种器官(包括肠道)在胚胎期的正常发育均需Hedgehog信号通路，胚胎形成后其活性降低甚至消失。人类中存在3种Hh的同源基因：Sonic Hedgehog(Shh)、India Hedgehog(Ihh)和Desert Hedgehog(Dhh) ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2345kb)。