依诺肝素钠原料药细菌内毒素检查方法的研究(2)
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2.3 供试品的最小有效稀释浓度
最小有效稀释浓度C=λ/L，其中：λ为鲎试剂的灵敏度(EU/U)；L为依诺肝素原料药的细菌内毒素限值(EU/mg)。本品为原料药，确定最小有效稀释倍数(MVC)，当L=0.01 EU/U，取灵敏度(λ)0.03 EU/mL的鲎试剂，由公式C=λ/L计算出供试品的最小有效稀释浓度为3 U/mL。
2.4 干扰预试验[7]
取依诺肝素钠(批号：50211202、50211203、50211 301)，分别精密称取适量，精密加BET用水依次制成浓度为24、12、6、3 U/mL的溶液，记为NPC系列；另制备含有2λ(0.06 EU/mL)细菌内毒素的同一样品浓度系列，记为PPC系列。用λ为0.03 EU/mL的2个厂家的TAL分别与上述NPC和PPC系列溶液进行反应[7]，每个浓度重复2管，并设阴性对照(NC)和阳性对照(PC)各2管。结果见表2。由干扰预试验结果可初步了解，供试品溶液稀释至24、12、6、3 U/mL浓度时，对2个厂家的TAL与细菌内毒素的反应均不存在干扰作用。其中鲎试剂灵敏度λ=0.03 EU/mL。
表2 干扰预试验
注：TAL：鲎试剂；NPC：供试品；PPC：供阳；PC：阳性对照；NC：阴性对照；每1个浓度重复2管
2.5 正式干扰试验(鲎试剂：灵敏度λ=0.03 EU/mL)
按限值L<0.01 EU/U计算，用灵敏度λ=0.03 EU/mL的鲎试剂，最小有效稀释浓度为3 U/mL。故选择3 U/mL作为供试品溶液的配制浓度。为了进一步确认供试品溶液对λ=0.03 EU/mL的鲎试剂是否存在干扰作用，分别用BET水和浓度为3 U/mL的供试品溶液进行实验，将洗净内毒素工作标准品配制成1λ、2λ、0.5λ、0.25λ浓度的系列内毒素溶液。精密称取依诺肝素钠(批号：50211202、50211203、50211301)适量，分别用BET用水制成最终浓度为3 U/mL的溶液 ......
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