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编号:12056166
芹菜甲素对拟痴呆大鼠脑神经元保护机制的研究(2)
http://www.100md.com 2009年3月25日 《中国当代医药》 2009年第9期
芹菜甲素对拟痴呆大鼠脑神经元保护机制的研究
芹菜甲素对拟痴呆大鼠脑神经元保护机制的研究
芹菜甲素对拟痴呆大鼠脑神经元保护机制的研究

     1.2.3测试后处理于迷宫测试完成后末次给药后12 h,经心室腔穿刺取血。取血后立即断头取脑,去除血液及脑膜,置于液氮罐中保存备用。

    1.2.4SOD和MDA测定血液经2%的EDTA抗凝离心后取血清,分别按试剂盒说明书进行测定。

    1.2.5观察皮质和海马病理学变化分组取大脑,10%中性缓冲液福尔马林固定4 h以上,石蜡包埋。冠状连续切片8张(4 μm),HE染色, 免疫组化采用SP法,光镜下观察皮质、海马。

    1.2.6神经细细胞内游离钙离子浓度的测定剥离脑皮质和海马组织,分别置于DMEM培养液中剪碎,用吸管吹打分散细胞,经300目铜网过滤,离心后弃上清,0.01 mol/L PBS洗涤,台盼蓝排斥试验检查,细胞成活率达90%。细胞悬液在37℃水浴中预温5 min,加入Fura 2·AM-1使终浓度为5 μmol/L,于37℃水浴中恒温振荡40 min进行负载。后以D Hank's液洗涤,并制成1×106/ml的单细胞悬液。采用Fluostar多功能微孔分析仪,激发波长340 nm和380 nm,发射波长505 nm,测定荧光强度,并按文献公式计算出神细细胞内游离钙离子。

    1.2.7流式细胞仪检测细胞凋亡的定量分析[5-6]剥离脑皮质和海马组织,在冷70%乙醇中固定。用吸管吹打分散细胞,加入0.25%的胰蛋白酶液,37℃消化30 min,经300目铜网过滤,0.01 mol/L PBS洗涤并制成单细胞悬液,调整细胞密度为1×106/ml。DAB显色,采用TUNEL检测法。将所得数据经Macintosh 650型计算机上用CellQuestPlot软件(BD公司生产)分析数据 ......
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