益脑胶囊对大鼠脑缺血再灌注后脑组织细胞间黏附分子表达的影响(2)
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1.2.4 观察指标
1.2.4.1 神经功能评分(NSS)：每组大鼠分别于再灌注后2、12、24 h进行神经功能评分，最高18分，最低0分。
1.2.4.2 免疫组化测定ICAM-1表达：到预定时间，大鼠用0.9%NaCl溶液和多聚甲醛进行心脏灌流固定，断头取脑。经尾壳核水平行冠状切片(脑片厚度约15 mm，共A、B、C、D、E 5个脑片)，固定、脱水、包埋成蜡块，连续切片，连取5张作免疫组化染色，按照试剂盒说明书用SP法进行ICAM-1免疫组化染色，阳性细胞为胞浆棕黄色颗粒。阴性对照以PBS代替一抗，其余步骤同上。每张切片在10×40倍显微镜下随机选取缺血区内的4个视野，进行ICAM-1阳性细胞的计数。
1.3 统计学分析
数据采用x±s表示，应用SPSS 16.0软件进行统计学分析。组间差异采用单因素方差分析，以α=0.05作为显著性检验标准。
2 结果
2.1 神经功能评分
假手术组手术后无神经功能缺损体征出现，神经功能缺损评分为0分。模型组与治疗组均有不同程度的神经功能缺损，治疗组神经功能有所改善(P﹤0.05)，且再灌注24 h改善最明显(P﹤0.01)。数据见表1。
2.2 ICAM-1的表达
在假手术组ICAM-1呈少量低表达，缺血灶大脑皮质内有明显表达(图1)。模型组较假手术组表达均增高(P﹤0.01)，且呈逐渐增高的趋势(图2、3、4)。治疗组相同时间点表达均低于模型组，且再灌注12、24 h降低更明显(图5、6、7)。数据见表2。
同一时间点与假手术组比较，*P﹤0.01；与模型组比较，△P﹤0.05，△△P﹤0.01
3 讨论
近年来黏附分子在脑缺血再灌注损伤中作用的研究已成为研究的热点之一。在正常情况下，血管内皮细胞上仅有少量ICAM-1表达，脑缺血时，在TNF-α、IL-1和INF等共同作用下，ICAM-1在血管内皮细胞的表达明显上调，介导中性粒细胞黏附，在脑缺血再灌注损失中起重要作用[4]。黏附分子在脑缺血后的作用已在实验性持久性或短暂性局灶脑缺血动物模型中得到证实。在20世纪90年代，有许多关于动物脑缺血或再灌注后在缺血区域黏附分子表达升高的报道，比如ICAM-1等[5]。抗黏附分子实验研究证实，针对ICAM-1、P-选择素等的单克隆抗体可以减轻脑或脊髓的缺血损害，有神经保护作用，并且对神经的保护作用在短暂缺血然后进行再灌注后较明显，而在永久缺血模型中不明显[6]。本研究结果显示，脑缺血再灌注2 h后ICAM-1的表达开始升高，并于24 h达到峰值。应用益脑胶囊后能明显下调ICAM-1的表达，且能够改善神经功能，提示益脑胶囊可能通过降低ICAM-1的表达抑制炎症反应，发挥脑保护作用。
益脑胶囊为纯中药制剂，主要由鹿茸、人参、党参、灵芝、茯苓、龟甲胶、麦冬、五味子、石菖蒲、龙骨、远志等组成，有健脑益智，益气健脾，滋肾养肝，通窍醒脑之功。其中鹿茸已经被动物试验证明可抑制各种急慢性炎症，保护细胞质膜的完整性及改善线粒体、内质网等细胞器的损伤[7]。更有研究表明鹿茸多肽具有促进神经再生、加快神经轴突生长速度，有助于功能恢复的作用[8]。党参水提物通过提高机体免疫功能，清除衰老机体产生过多的自由基，抗脂质过氧化而起到延缓衰老的作用[9]。人参中含有的主要有效成分人参皂苷同时具有保护脑细胞免受缺血再灌注损伤及抗缺氧等作用[10]。近几年来实验已经证明益脑胶囊具有抗衰老、改善学习记忆等功效[11]。本实验结果显示益脑胶囊可抑制脑缺血再灌注后ICAM-1的表达，进而抑制炎症反应，减轻缺血再灌注后损伤，这可能是益脑胶囊的脑保护作用机制之一。
[参考文献]
[1]Zea-Longa E, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats [J].Stroke,1989,20(1):84-91.
[2]王诺,马风杰,张磊,等.线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的改进与体会[J].潍坊医学院学报,2010,32(1):27-28.
[3]吴远华,朱广旗,胡蓉,等.线栓法大鼠脑缺血再灌注模型改良与评价[J].中国实用神经疾病杂志,2010,13(18):6.
[4]路文革,白宏英,王建平.垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子表达的影响[J].中国实用神经疾病杂志,2007,10(2):54-55.
[5]Jander S, Kraemer M, Schroeter M, et al. Lymphocytic infiltration and expression of intercellular adhesion molecule-1 in photochemically induced ischemia of the rat cortex[J] ......
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