1.2疫苗制备

    将Ag85A基因序列全长扩增，经测序、同源性分析后，插入pCDNA3.1+真核表达载体，经鉴定正确后转化入DH5α扩增，无内毒试剂盒提取、纯化质粒pCDNA3.1+/Ag85A，灌胃前将脂质体LipofectamineTM 2000与质粒充分混匀，4℃静置20 min，待脂质体充分包裹后制成口服DNA疫苗[5]。

    1.3动物分组及免疫

    将10只雌性6～8周龄的C57BL/6小鼠随机分成两组，免疫前2 h禁食水。用7.5% NaHCO3和Hank液按1∶4比例混合制备胃酸中和液，每只鼠灌胃300 μl胃酸中和液中和胃酸，30 min后灌胃免疫。实验组小鼠灌胃100 μg脂质体包裹的重组pCDNA3.1+/Ag85A质粒DNA疫苗，对照组小鼠灌胃等量的生理盐水。每组小鼠免疫3次，每次间隔14 d[6]。

    1.4免疫组化技术检测小鼠肠道局部Ag85A的表达

    在口服疫苗免疫结束后14 d处死小鼠，PBS冲洗小肠组织 ......