1.2.3 ELISA法檢测VEGF表达 NRG1转染的BMSCs培养3 d后，接种于6孔板，作为转染组，每孔含培养液3 ml(每孔底部铺有的盖玻片用于免疫组化检测)。分别从继续培养2、3、4、5 d的培养板各孔中分别吸取1 ml培养液至各EP管中(各孔吸取1 ml后，补充新鲜培养液1 ml)，1000 r/min离心15～20 min，取出上清装入新EP管中，标记编号后将样本放入-80℃超低温冰箱保存备用；将未转染NRG1的BMSCs的培养液作为空白对照组。按照ELISA试剂盒说明检测每个标本中VEGF的含量。

    1.2.4免疫荧光方法检测VEGF 取出6孔板中的盖玻片，D-Hank液漂洗3次；4%甲醛/PBS液固定15 min后，D-Hank液漂洗3次；1%牛血清白蛋白封闭30 min，加入100倍稀释的一抗VEGF抗体孵育100 min，D-Hank液漂洗3次；1%牛血清白蛋白封闭30 min；加二抗孵育40 min，D-Hank液漂洗3次；DAB显色1 min，D-Hank液漂洗3次；苏木精复染胞核，树胶封片 ......