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编号:12866487
尿液巨细胞病毒DNA联合血清巨细胞病毒特异抗体检测对婴儿(2)
http://www.100md.com 2016年7月5日 《中国医学创新》 2016年第19期
     1.2 检测方法

    1.2.1 尿液巨细胞病毒DNA检测 具体步骤:在灭菌离心管中加入1000μL干净的尿液,并将离心管置于离心机上以50 r/s的速度离心10 min,分离澄清尿液和尿渣后,往尿渣中注入50μL的DNA提取液,手握紧反应管摇动使提取液和尿渣混合均匀,将其放于达到100 ℃的仪器上进行10 min的干浴,干浴结束后进行5 min的离心操作,操作结束取上层清液进行由广州达安基因诊断有限公司生产的DA-7600 PCR仪扩增操作。扩增的靶区域为患儿巨细胞的AD-169基因组中早期转录调节蛋白IE1基因中的高保守非编码区,并在该区域置入特异性的荧光探针和引物。将取好上清液放到DA-7600 PCR仪及配套的试剂盒的反应管中,然后在扩增仪中进行扩增操作,93 ℃下2 min预变性45 s;

    55 ℃ 45 s,10个循环左右;93 ℃ 30 s、45 s,30个循环。操作结束后,将数据输入电脑进行计算和分析,将基因拷贝数/mL作为尿液巨细胞病毒DNA的单位,尿液巨细胞病毒DNA拷贝数/mL超过500表示患儿检测结果为阳性。

    1.2.2 血清巨细胞病毒特异性抗体检测 具体步骤:真空管中加入从患儿空腹状态下抽取的2 mL的静脉血液,盖上盖子上下倒置使其充分混合,并将其置于离心机上以50 r/s的速度离心5 min,离心结束后放于低温-80 ℃中备测,使用美国雅培公司生产的化学发光仪进行血清巨细胞病毒特异性抗体检测 ......
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