1.2 方法

    两组均于手术治疗时取宫骶韧带-子宫主韧带复合体离体标本，获得非POP及POP组织，应用定量RT-PCR方法检测两组宫骶韧带-子宫主韧带复合体离体标本，检测mtDNA、胶原蛋白Ⅰ mRNA、胶原蛋白Ⅲ mRNA水平的表达，具体步骤：RNA提取、反应体系配制、加RNA模板、RT-PCR反应、2.0%琼脂糖凝胶制备、电泳、RT-PCR产物检测，将电泳胶放入凝胶成像系统观察，以内参基因为基准分析各条带的相对密度值。

    采用免疫蛋白印记法(western-blot)检测两组标本IGF-1、胶原蛋白Ⅰ蛋白、胶原蛋白Ⅲ蛋白的表达。主要步骤：SDS-PAGE凝胶制备及灌胶，上样、电泳、切胶及制备硝酸纤维素膜(PVDF)、转膜、抗原封闭、加入一抗、二抗，在避光条件下显影，凝胶扫描成像系统分析，评估相对灰度值。

    线粒体DNA(mtDNA)核酸检测试剂盒(北京索奥生物医药科技有限公司)，人IGF-1试剂盒(厦门慧嘉生物科技有限公司)，人胶原蛋白ⅠmRNA、人胶原蛋白Ⅲ mRNA、胶原蛋白Ⅰ蛋白、胶原蛋白Ⅲ蛋白试剂盒(上海科顺生物科技有限公司);凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司) ......